1.SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
(1)灌膠前的準備：a) 洗板；b)配板
(2)凝膠的配制
(3)灌膠
(4)樣品制備、上樣
(5)電泳
2、轉移蛋白質到硝酸纖維素薄膜上
(1)準備轉移緩沖液。
(2)切割與膠尺寸相符的硝酸纖維素薄膜，并用轉移緩沖液浸濕，放置15 min直到沒有氣泡。
(3)切割8張普通濾紙，其大小與膠尺寸大小相符，并將其浸泡在有轉移緩沖液的培養皿中(與硝酸纖維素薄膜分開浸泡)。
(4)電泳后，切取有用部分的膠，并很快地在轉移緩沖液中洗滌。
(5)打開蛋白質轉移槽的蓋板，依次放入：
①4張用轉移緩沖液浸泡過的濾紙；
②用轉移緩沖液洗過的膠，并小心地趕走濾紙和膠之間的所有氣泡；
③放上硝酸纖維素膜；
④另4張用轉移緩沖液浸泡過的濾紙。
(6)小心地合上轉移槽的蓋板；
(7)插入電極，注意正負極方向(硝酸纖維素膜面向陽極)，轉膜裝置置于冰水中，打開電泳儀開關，調至膠的面積(cm2)×0.8 mA，1~2 h。
(8)轉移結束后打開蓋板取出硝酸纖維素薄膜。轉膜的效果也可以用麗春紅染色液對膜進行染色，以觀察實際的轉膜效果。從轉膜完畢后所有的步驟，一定要注意膜的保濕，避免膜的干燥，否則極易產生較高的背景。
3、免疫印跡膜的處理
(1)用TBST緩沖液洗膜3次，每次10-15 min。
(2)將膜用封閉溶液封閉，用搖床輕搖4℃過夜或室溫封閉1h。
(3)用TBST緩沖液洗膜3次，每次10-15 min。
(4)將膜置于第一抗體溶液中，置搖床上輕搖，37℃搖動1-2 h，或4℃緩慢搖動孵育過夜。
(5)回收一抗，并用TBST洗膜3次，每次10-15 min。
(6)將膜置于辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG溶液中，37℃輕搖1 h。
(7)回收二抗，并用TBST洗膜3次，每次10 min。
(8)最后用TBS溶液洗，以轉移Tween-20。
(9)加底物溶液反應2～10min，至抗原區帶顯色清楚為止。
(10)用去離子水洗滌，以終止反應。將膜夾在濾紙間，干燥。置暗處保存。