1. 常規石蠟切片60℃烤片2小時；
2. 脫蠟。二甲苯脫蠟15min，兩次；
3. 水化。依次用無水乙醇、95%、90%、80%、70%，各一次2min，之后在蒸餾水中孵育5min；
4. PBS（pH7.4）浸泡5min；
5. 抗原修復：高壓修復（EDTA，pH8.0或0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液，pH6.0高壓10-15min），PBS洗2-3min；
6. 3% H2O2去離子水37℃孵育10min，PBS洗；
7. 正常山羊血清封閉，37℃孵育10-20min，勿洗；
8. 適當比例的一抗工作液孵育，4℃過夜或37℃ 1h；
9. 復溫20min，PBS洗3min，三次；
10. 二抗孵育：加生物素化標記二抗，37℃，10-15min，PBS洗3min，三次；
11. 三抗孵育：加辣根酶標記的鏈酶卵白素，37℃，10-15min，PBS洗3min，三次；
12. 加DAB顯色劑顯色，鏡下觀察結果，適時終止；
13. 蘇木素復染5min，自來水沖洗片刻，75%的鹽酸酒精溶液分化30s，自來水沖洗5min藍化；
14. 脫水。依次經過70%、80%、90%、95%、無水乙醇，各2min，二甲苯15min，三次；
15. 封片，中性樹膠封片。
光學顯微鏡100×或400×觀察，拍片。
圖象評分。