福爾馬林固定的組織有可能破壞了原來組織的抗原結構,蛋白多肽發生交聯,導致部分抗原表位封閉,結合位點減少,所以需要抗原修復,以暴露原來的抗原表位,達到充分顯露抗原,以不出現明顯脫片現象為佳。
抗原修復常用以下幾種方法:
1. 高壓熱修復:在沸水中加入EDTA(pH8.0)或0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液(pH6.0),蓋上不銹鋼鍋蓋,但不能鎖定。將玻片置于金屬染色架上,緩慢加壓,使玻片在緩沖液中浸泡5min,然后將蓋子鎖定,小閥門將會升起來。10min后除去熱源,置入涼水中,當小閥門沉下去后打開蓋子。此方法適用于較難檢測或核抗原的抗原修復。(骨及軟骨組織的標本最好選擇較溫和的微波加熱修復)
2. 沸熱修復: 電爐或水浴鍋加熱0.01M枸櫞酸鈉緩沖液(pH6.0)至95℃左右,放入組織切片加熱10-15min。
3. 微波爐加熱:在微波爐里加熱0.01M枸櫞酸鈉緩沖液(pH6.0)至沸騰后將組織芯片放入,斷電,間隔5-10min,反復1-2次。根據情況可參考采用微波加熱“3-5-3法”3分鐘溫火沸騰后靜止5min,再溫火沸騰3min即可。
4. 酶消化方法:常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前預熱至37℃,消化時間約為5-30min。