識別區域的選擇原則一般說來最理想的抗原性識別區域應具備親水、位于蛋白表面和結構上易變形性等特點。既要考慮其免疫原性、特異性,還需考慮其合成難度等。通常有以下幾點建議:
1、序列長度在8-20個氨基酸殘基之間(如果太短,就有多肽太特殊、所產生的抗體與天然蛋白之間的親和力(結合能力)不夠強的風險,同樣,如果序列長度超過20,將有可能引入二級結構,所產生的抗體失去特異性的可能,而且肽鏈越長,通常合成難度增大,不易獲得高純度的產品);
2、盡可能是在蛋白表面;
3、保證該段序列不形成α-helix;
4、N,C端的肽段比中間的肽段更好;避免蛋白內部重復或接近重復段的序列;
5、避免同源性太強的肽段;
6、交聯可以交聯在N,C兩端,選擇依據就是交聯在對產生抗體不太重要的一端;
7、序列中不能有太多的Pro,但有一兩個Pro有好處,可以使肽鏈結構相對穩定一些,對產生特異性抗體有益。