免疫沉淀是利用特異性抗體識別并分離抗原的方法。
一、實驗材料：
上樣buffer的配方(用前現配):
2ul 1.25M Tris-HCL , pH 6.8
35ul distilled water
2.5ul 2-mercaptoethanol
12.5ul 10%SDS
10ul 80% glycerol
2ul bromphenol blue
TNE buffer:
10mM Tris-HCl pH 8.0
10mM NaCl
0.5mM EDTA
二、實驗方法：
1．用含有1% NP40的緩沖液重懸細胞，充分振蕩；
2．在冰上孵育30分鐘或37℃孵育10—15分鐘；
3．轉入eppendorf管中離心3分鐘；
4．將上清輕輕倒入一干凈試管，加入40—50 ul抗血清；
5．冰上孵育2小時或4℃過夜；
6．在TNE中加入100ul SPA 和100ul 5% BSA；
7．冰上孵育2小時；
8．離心使免疫復合物成球，用1ml含1%NP40,0.5% Na deoxychloate, 0.1% SDS 的TNE,在用超聲波重懸；
9．加入70ul的上樣緩沖液，振蕩；
10．熱水中水浴90秒，離心1分鐘，保留上清；
11．若不立即實驗請低溫保存。